油脂 中脂肪酸含量测定 ――― 气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分

油脂 中脂肪酸含量测定 ――― 气相色谱法测定大豆油中脂肪酸成分 
油脂是食品加工中重要的原料和辅料，也是食品的组分和营养成分。脂肪酸是维持人体生理活动的条件，人体所必需的脂肪酸一般取自食品用油，即食用油脂。气相色谱法测定油脂脂肪酸组分是现在常用的方法
甲酯化是分析动植物油脂脂肪酸成分的常用的前处理方法，也是常用的标准方法（GB/T 17376-1998）。 
二、原理 
本实验甲酯化方法采用--GB/T 17376-1998，甘油酯皂化后，释出的脂肪酸在三氟化硼存在下进行酯化，萃取得到脂肪酸甲酯用于气相色谱分析。 
样品中的脂肪酸（甘油酯）经过适当的前处理（甲酯化）后，进样，样品在汽化室被汽化，在一定的温度下，汽化的样品随载气通过色谱柱，由于样品中组分与固定相间相互用的强弱不同而被逐一分离，分离后的组分，到达检测器（detceter）时经检测口的相应处理（如FID的火焰离子化），产生可检测的信号。根据色谱峰的保留时间定性，归一法确定不同脂肪酸的百分含量。 
三、仪器与试剂 
（一）仪器 
1．气相色谱仪：具氢火焰离子化检测器（FID）。 
2．恒温水浴锅 
3．移液管 
4．胶头滴管 
5．小圆底烧瓶 
6．冷凝管 
7. 样品瓶 
（二）试剂 
1.正己烷：分析纯，沸程60～90℃或30～60℃，重蒸。 
2.氢氧化钾甲醇溶液 
3.三氟化硼甲醇溶液 
4.饱和食盐水 
5.市售大豆油 
四、实验步骤 
（一）样品预处理 
甲酯化： 
取2~4滴大豆油样品于xml的圆底烧瓶中，加入3ml的KOH甲醇溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温（可用水冷），加入5ml三氟化硼溶液，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入3ml正己烷，70℃水浴加热回流5min；取出冷却至室温，加入适量饱和食盐水溶液，静止3~5min，取上层油样1ml于试样瓶中，进GC分析。 
测定： 
（1）气相色谱条件 
①色谱柱：石英弹性毛细管柱，0.25mm（内径）×60m，内膜厚度0.32。 
②程序升温： 150℃保持3min，5℃/min升温至220℃，保持10min；进样口温度250℃；检测器温度300℃。 
③气体流速：氮气：40mL/min，氢气：40mL/min，空气：450mL/min，分流比30﹕1。 
④柱前压：25kpa 
（2）色谱分析 
自动进样，吸取1μL试样液注入气相色谱仪，记录色谱峰的保留时间和峰高。利用标准图谱确定每个色谱峰的性质（定性），利用软件自带的自动积分方法计算各脂肪酸组分的百分含量。 
五、注意事项 
1．本法检测灵敏度高，在分析时应注意防止由于色谱柱中高沸点固定液、样品净化不完全及载气不纯等带来的污染，使其灵敏度下降。 
2．本方法采用极性色谱柱，样品处理时应尽力保证脱水彻底。 
3．本实验采用自动进样，序列采集，工作站在序列运行之后不再允许更改序列采集方法，所以在运行某一序列之前应确认程序编辑无误。 
4．为了保护毛细管柱，一定要确认升温程序在该型号色谱柱的温度允许范围内。